干酪乳桿菌對(duì)便秘小鼠腸道菌群的影響

科技發(fā)展提高人類生活質(zhì)量的同時(shí)，也形成了不良生活方式和不健康飲食習(xí)慣，大大增加了便秘、炎癥性腸病等腸道疾病[1-3]。其中便秘的患病率最高，大約30%的人在一生中會(huì)經(jīng)歷便秘不適，老年人和婦女受之影響更甚[4]。長(zhǎng)期便秘的患者，由于糞便在腸道內(nèi)停留過久，導(dǎo)致腸道內(nèi)有害物質(zhì)增多，對(duì)腸黏膜完整和肝臟代謝造成損傷[5]。人類腸道中大約有1 014種微生物定植，統(tǒng)稱為腸道菌群，它們相互制約，相互依存[6]，在發(fā)揮宿主生理功能、抵抗感染和自身免疫性疾病的風(fēng)險(xiǎn)方面發(fā)揮著重要作用[7]。腸道菌群的多樣性受到病理狀況、遺傳、飲食習(xí)慣、藥物和環(huán)境等多因素的影響[8]。腸道菌群的變化與疾病的發(fā)生密切相關(guān)[9]。腸道菌群的破壞還會(huì)影響短鏈脂肪酸的產(chǎn)生，進(jìn)而降低胰高血糖素肽的產(chǎn)生，抑制腸道的傳遞功能，進(jìn)一步影響胃腸道動(dòng)力學(xué)[10-11]。而腸道是重要的消化器官，對(duì)腸道的損傷可能導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)吸收障礙和對(duì)身體的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)不足[12]，進(jìn)而引發(fā)其他疾病。

目前，頑固性便秘主要依賴藥物治療，但存在腹瀉、腹痛、藥物依賴等副作用[13]。臨床實(shí)踐證實(shí)，益生菌在治療便秘過程中發(fā)揮較好的效果，安全無副作用。目前常用于治療便秘的益生菌有干酪乳桿菌、副干酪乳桿菌、植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、兩歧雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌等[14-16]，緩解便秘效果較好。

在本研究中，我們通過16S rRNA基因的V3～V4可變區(qū)進(jìn)行Miseq測(cè)序，分析復(fù)方地芬諾酯導(dǎo)致小鼠便秘后腸道菌群的變化，以及干酪乳桿菌干預(yù)便秘小鼠后腸道菌群變化。通過探究干酪乳桿菌對(duì)便秘小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)及菌落豐富度的影響，推測(cè)干酪乳桿菌降解腸道毒素的益生途徑。研究結(jié)果可為干酪乳桿菌緩解便秘作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)，也能夠拓寬干酪乳桿菌的益生功能和應(yīng)用范圍。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)健康、昆明小鼠(生產(chǎn)許可證號(hào)：SYXK(川)2018-119)72只，4～5周齡，體重(20±2)g，成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，飼養(yǎng)環(huán)境溫度22 ℃，12 h 明暗交替，自由進(jìn)食、飲水。

1.1.2 儀器與試劑

Arktik PCR儀、NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)，賽默飛世爾科技公司；MISEQ測(cè)序儀、Illumina高通量測(cè)序儀，Illumina公司；QuantiFluorTM-ST 藍(lán)色熒光定量系統(tǒng)，Promega公司。

試驗(yàn)菌株為課題組前期從8名3～8歲健康兒童糞便中篩選的具有高效降解3-甲基吲哚能力的干酪乳桿菌。MS培養(yǎng)基，北京路橋技術(shù)有限公司；復(fù)方地芬諾酯片，河南鼎昌藥業(yè)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 飼料制備

基礎(chǔ)飼料，成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供；營(yíng)養(yǎng)成分具體為(質(zhì)量分?jǐn)?shù))：水分7.3%，粗蛋白質(zhì)21.1%，粗纖維3.2%，粗脂肪5.4%，粗灰分6.0%，總磷0.94%，鈣1.22%。

1.2.2 溶液的制備

復(fù)方地芬諾酯溶液：復(fù)方地芬諾酯片每片含復(fù)方地芬諾酯2.5 mg，小鼠便秘模型灌胃復(fù)方地芬諾酯溶液的計(jì)量為20 mg/(kg BW·d)。

1.2.3 小鼠便秘模型建立

昆明雄性小鼠72只，4周齡，體重(20±2)g，體形豐滿，營(yíng)養(yǎng)良好，行動(dòng)靈敏，飲食、飲水及糞便正常。在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下給予基礎(chǔ)飼料，自由進(jìn)食和飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)選取12只小鼠作為正常對(duì)照組[平均體重為(26.12±0.63)g]，灌胃0.5 mL生理鹽水；其余60只小鼠作為便秘組[平均體重為(26.54±1.19)g]，灌胃劑量為20 mg/(kg BW·d)復(fù)方地芬諾酯溶液，共計(jì)7 d。每天稱量小鼠體重，并根據(jù)體重調(diào)整灌胃量。每天記錄小鼠的飲食飲水量，收集每組小鼠在灌胃后6 h的糞便，計(jì)算小鼠糞便粒數(shù)、新鮮糞便質(zhì)量及含水率，計(jì)算如公式(1)所示。以其均顯著低于正常對(duì)照組，確定便秘小鼠造模成功，挑取造模成功的小鼠進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

糞便中含水率

(1)

式中：A，新鮮糞便質(zhì)量，g；B，烘干后糞便質(zhì)量，g。

1.2.4 小鼠分組

正常對(duì)照組12只小鼠，便秘小鼠按體重隨機(jī)分成5組，每組12只。分組如表1所示。

表1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組情況
Table 1 Experiments in rats grouping

飼喂時(shí)嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作規(guī)程進(jìn)行，飼養(yǎng)環(huán)境溫度22～27 ℃，相對(duì)濕度50%～70%，12 h明暗交替，每天上午9點(diǎn)稱量與添加飼料、計(jì)算飲水量并更換飲水瓶，清洗托盤，即時(shí)清除糞便等。每天10點(diǎn)開始灌胃，正常對(duì)照組與模型對(duì)照組小鼠灌胃生理鹽水，陽性對(duì)照組灌胃嗜熱鏈球菌，其余各組便秘小鼠灌胃相應(yīng)濃度的干酪乳桿菌。飼養(yǎng)時(shí)間共計(jì)3 d。

1.2.5 樣本收集

實(shí)驗(yàn)期間，每天灌胃后將小鼠放入高壓滅菌代謝籠，在灌胃6 h后收集各組小鼠糞便，稱量糞便質(zhì)量、計(jì)數(shù)糞便粒數(shù)，新鮮糞便于60 ℃烘箱中烘干后計(jì)算糞便含水率。同時(shí)，無菌收集10粒新鮮糞便，分裝于2個(gè)滅菌EP管中，放入-80 ℃的冰箱保存。

1.2.6 小鼠糞便DNA提取

小鼠糞便中微生物群落總DNA抽提根據(jù) E.Z.N.A.? soil DNA kit說明書進(jìn)行。接著使用1%的瓊脂糖凝膠電泳(5 V/cm，20 min)檢測(cè)DNA的提取質(zhì)量，使用NanoDrop 2000微量分光光度計(jì)測(cè)定DNA濃度和純度(A260/230和A260/280)。

1.2.7 16S rRNA基因V3～V4可變區(qū)的PCR擴(kuò)增

以1.2.6中提取的細(xì)菌基因組DNA為模板，引物為338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)，對(duì)16S rRNA基因V3～V4可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

1.2.8 PCR產(chǎn)物回收

PCR產(chǎn)物用2.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，使用AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒回收純化，并用QuantiFluorTM-ST藍(lán)色熒光定量系統(tǒng)對(duì)回收產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)定量，之后按照每個(gè)樣本的測(cè)序量要求，進(jìn)行相應(yīng)比例的混合。

1.2.9 小鼠腸道微生物群落結(jié)構(gòu)的高通量測(cè)序分析

構(gòu)建PE 300文庫(kù)，利用Illumina公司的Miseq PE300平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序，由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成測(cè)序。

1.3 小鼠腸道菌群Alpha多樣性分析

使用UCHIME軟件將嵌合體序列去除，抽平后根據(jù)UPARSE軟件中相似度的默認(rèn)值97%對(duì)序列進(jìn)行操作分類單元(operational taxonomic units，OTU)的聚類。采用RDP classifier貝葉斯算法對(duì)97%相似水平的OUT代表序列進(jìn)行分類學(xué)分析，并在各個(gè)分類水平統(tǒng)計(jì)各樣本的群落組成。每組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±δ)表示，多組間比較采用單因素方差分析最小顯著差別(least significant difference，LSD)法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 干酪乳桿菌對(duì)便秘小鼠糞便粒數(shù)、質(zhì)量、含水率的影響

由表2可以看出，與正常對(duì)照組相比，各便秘組小鼠糞便粒數(shù)顯著降低(P<0.05)，糞便粒數(shù)僅為正常對(duì)照組的29.17%～34.38%。干酪乳桿菌干預(yù)后，小鼠糞便粒數(shù)逐漸穩(wěn)步上升。干預(yù)3 d后，干酪乳桿菌低、中、高劑量組小鼠糞便粒數(shù)分別為模型對(duì)照組的1.78、1.67、1.60倍(P<0.05)；其中效果最好的為低劑量組，優(yōu)于陽性對(duì)照組(P>0.05)。

表2 干酪乳桿菌對(duì)便秘小鼠糞便粒數(shù)的影響
Table 2 Effect of Lactobacillus casei on fecal number of constipated mice

注：不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)(下同)

由表3可知，與正常對(duì)照組相比，便秘組小鼠糞便重量明顯減少，僅為正常對(duì)照組的31.31%～39.39%(P<0.05)。干酪乳桿菌干預(yù)后，各組便秘小鼠糞便重量均有增加趨勢(shì)。干預(yù)3 d后，干酪乳桿菌低、中、高劑量組糞便質(zhì)量分別為模型對(duì)照組的1.98、2.18、2.16 倍(P<0.05)；干酪乳桿菌中、高劑量效果較好，且與陽性對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)。

表3 干酪乳桿菌對(duì)便秘小鼠糞便質(zhì)量的影響 單位：g

Table 3 Effect of Lactobacillus casei on fecal weight of constipated mice

從表4可以得出，與正常對(duì)照組相比，便秘小鼠糞便中的含水率顯著降低，僅為正常對(duì)照組的61.41%～65.08%(P<0.05)。干酪乳桿菌干預(yù)3 d后，干酪乳桿菌低、中、高劑量組小鼠糞便含水率逐漸升高，分別為模型對(duì)照組的1.31、1.35、1.40倍(P<0.05)，其中高劑量組效果最好，且均與陽性對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)。

造模結(jié)束時(shí)，便秘組小鼠糞便粒數(shù)、質(zhì)量以及含水率均顯著低于正常對(duì)照組。干酪乳桿菌干預(yù)3 d后，與模型對(duì)照組相比，干酪乳桿菌低、中、高劑量組小鼠的糞便粒數(shù)、質(zhì)量以及含水率顯著升高(P<0.05)。表明復(fù)方地芬諾酯可以通過促進(jìn)腸道水分吸收，造成因腸蠕動(dòng)抑制而致的小鼠便秘。干酪乳桿菌可以通過抑制腸道水分重吸收，從而增加糞便中的含水率，達(dá)到緩解便秘的作用。

表4 干酪乳桿菌對(duì)便秘小鼠糞便含水率的影響 單位：%

Table 4 Effect of Lactobacillus casei on fecal water content of constipated mice

2.2 小鼠腸道菌群Alpha多樣性分析

樣品中的細(xì)菌Shannon指數(shù)、Chao指數(shù)、Sobs指數(shù)、Simpson指數(shù)、Coverage指數(shù)等指標(biāo)進(jìn)行綜合分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品多樣性進(jìn)行分析。反映群落豐富度的指數(shù)有Sobs、Chao，反映群落多樣性的指數(shù)有Shannon、Simpson，反映群落覆蓋度的指數(shù)有Coverage。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5、表6。

表5 造模結(jié)束時(shí)小鼠腸道菌群Alpha多樣性分析
Table 5 Analysis of Alpha diversity of intestinal microflora in mice at the end of modeling

表6 干酪乳桿菌干預(yù)后小鼠腸道菌群Alpha多樣性分析
Table 6 Analysis of Alpha diversity of intestinal microflora in mice after intervention of Lactobacillus casei

在做干酪乳桿菌干預(yù)實(shí)驗(yàn)前，隨機(jī)在各組小鼠中選擇幾只進(jìn)行腸道菌群結(jié)構(gòu)分析，無顯著差異。造模后，與正常對(duì)照組相比，其余各組的Chao指數(shù)較高。此外，Chao指數(shù)是Sobs數(shù)目的1.3倍左右，表明本研究的細(xì)菌多樣性測(cè)序深度達(dá)到了豐富度估計(jì)值的77%左右。便秘組小鼠Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)均高于正常對(duì)照組，表明小鼠便秘后腸道菌群多樣性有所降低，且各組間差異不大。所有樣品的覆蓋率介于99.22%～99.25%，表明糞便中幾乎所有的細(xì)菌物種信息都能被檢測(cè)到。

與模型對(duì)照組相比，干酪乳桿菌干預(yù)的3組便秘小鼠的Chao指數(shù)是Sobs數(shù)目的1.3倍左右，表明本研究的細(xì)菌多樣性測(cè)序深度達(dá)到了豐富度估計(jì)值的77%左右。與模型對(duì)照組相比，干酪乳桿菌低劑量組和陽性對(duì)照組的Shannon指數(shù)升高，而干酪乳桿菌中劑量組、高劑量組降低，表明干酪乳桿菌低劑量組、陽性對(duì)照組菌群多樣性較高，而干酪乳桿菌中劑量組、高劑量組較低。Simpson指數(shù)介于0.05～0.11，菌群多樣性差異不大。所有樣品的覆蓋率介于99.36%～99.42%，表明干預(yù)后小鼠糞便中幾乎所有的細(xì)菌物種信息都能被檢測(cè)到。

2.3 基于門水平上小鼠腸道菌群細(xì)菌分類學(xué)分析

便秘模型造模試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，6組小鼠腸道菌群隸屬于1域，1界，15門，21綱，41目，74科，180屬，317種。與干酪乳桿菌干預(yù)后相比，在門水平上增加了梭桿菌門(Fusobacteria)和浮霉菌門(Planctomycetes)。在門水平上對(duì)優(yōu)勢(shì)菌群進(jìn)行分析，結(jié)果如圖1所示。優(yōu)勢(shì)菌群為擬桿菌門(Bacteroidetes)、厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)。

圖1 門水平上便秘小鼠腸道細(xì)菌優(yōu)勢(shì)菌群分析
Fig.1 Analysis of predominant bacterial microflora in intestinal tract of constipated mice at phylum level

干酪乳桿菌干預(yù)試驗(yàn)完成后，6組小鼠的腸道菌群包含1域，1界，13門，19綱，39目，81科，198屬，335種。其中13門分別為擬桿菌門、放線菌門(Actinobacteria)、厚壁菌門、變形菌門、疣微菌門(Verrucomicrobia)、柔膜菌門(Tenericutes)、螺旋體門(Spirochaetes)、Patescibacteria菌門、Epsilonbacteraeota門、異常球菌-棲熱菌門(Deinococcus-Thermus)、脫鐵桿菌門(Deferribacteres)、藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria)和未分類到門的細(xì)菌(unclassified-k-norank-d-Bacteria)。在門水平上對(duì)優(yōu)勢(shì)菌群進(jìn)行分析，結(jié)果如圖2所示。優(yōu)勢(shì)菌群為擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門、放線菌門、Epsilonbacteraeota門。

以上結(jié)果提示干酪乳桿菌干預(yù)試驗(yàn)完成后，6組小鼠腸道菌群中優(yōu)勢(shì)菌群發(fā)生改變，灌胃干酪乳桿菌可以調(diào)節(jié)小鼠腸道菌群。

圖2 門水平上干酪乳桿菌干預(yù)便秘小鼠后腸道細(xì)菌優(yōu)勢(shì)菌群分析
Fig.2 Analysis of predominant bacterial microflora in intestinal after intervention of Lactobacillus casei at phylum level in constipated mice

2.4 基于屬水平上小鼠腸道菌群中優(yōu)勢(shì)菌群分析

如圖3所示，便秘試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，6組小鼠腸道菌群中的優(yōu)勢(shì)菌群為乳桿菌屬(Lactobacillus)、norank_f_Muribaculaceae、另枝菌屬(Alistipes)、Odoribacter。其中差異顯著的物種有乳桿菌屬、Rikenellaceae_RC9_gut_group(P<0.05)，差異極顯著的物種有另枝菌屬、螺桿菌屬(Helicobacter)、普雷沃氏菌屬(Prevotellaceae-UCG-001)、嗜冷桿菌屬(Psychrobacter)(P<0.01)、Prevotellaceae_NK3B31_group spp.(P<0.001)。造模后，與正常對(duì)照組相比，便秘小鼠腸道菌群中乳桿菌屬、另枝菌屬豐度有不同程度的降低，而普雷沃氏菌屬、norank_f_Muribaculaceae spp.豐度升高。提示便秘可導(dǎo)致腸道菌群發(fā)生改變。

圖3 屬水平上便秘小鼠腸道細(xì)菌組間差異顯著性檢驗(yàn)
Fig.3 Significant difference test of intestinal bacteria between groups of constipated mice at genus level
注：*0.01<P≤0.05，**0.001<P≤0.01，***P≤0.001(下同)

如圖4所示，干酪乳桿菌干預(yù)試驗(yàn)完成后，6組小鼠的腸道菌群中的優(yōu)勢(shì)菌群為norank_f_Muribaculaceae spp.、乳桿菌屬、擬普雷沃菌屬(Alloprevotella)、嗜冷桿菌屬。其中差異顯著的物種有嗜冷桿菌屬、擬桿菌屬(Bacteroides)、Odoribacter(P<0.05)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)(P<0.01)、螺桿菌屬、普雷沃氏菌屬、普雷沃氏菌科NK3B31群(Prevotellaceae_NK3B31_group)(P<0.001)。并且干酪乳桿菌干預(yù)后，與模型對(duì)照組相比，灌胃干酪乳桿菌的便秘小鼠腸道菌群中普雷沃氏菌屬、norank_f_Muribaculaceae豐度降低，另枝菌屬豐度升高；干酪乳桿菌中劑量組、干酪乳桿菌高劑量組、陽性對(duì)照組中乳桿菌屬豐度升高。此結(jié)果表明干酪乳桿菌可以提高腸道中乳桿菌屬、另枝菌屬的豐度，并降低條件致病菌普雷沃氏菌屬的豐度，從而改善腸道菌群。

圖4 屬水平上干酪乳桿菌干預(yù)便秘小鼠后腸道細(xì)菌組間
差異顯著性檢驗(yàn)
Fig.4 Significant difference test of intestinal bacteria between groups of constipated mice after intervention of Lactobacillus casei at genus level

3 結(jié)論與討論

在動(dòng)物的腸道中，各種菌群調(diào)節(jié)著腸道代謝和健康。很多研究表明新鮮糞便中菌群的變化能反映腸道內(nèi)菌群的情況。通過菌群多樣性分析，發(fā)現(xiàn)覆蓋率指數(shù)越高，能夠檢測(cè)出樣本中序列的概率也就越高；ACE指數(shù)、Chao l指數(shù)和Shannon指數(shù)越大，則表明菌群的多樣性和豐富度越高；Simpson指數(shù)越大，說明群落多樣性越低[17]。本研究通過高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)便秘后小鼠和干酪乳桿菌干預(yù)后小鼠的120個(gè)糞便樣品進(jìn)行了測(cè)序，共獲得6 132 570×2條序列。經(jīng)過隨機(jī)抽樣將測(cè)序深度均一化、數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化后，有效序列數(shù)為6 132 570，每個(gè)樣品的序列數(shù)為23 077，在97%的相似性水平上共劃分出1 531個(gè)OTU。對(duì)菌群進(jìn)行多樣性分析發(fā)現(xiàn)，便秘組小鼠Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)均高于正常對(duì)照組，表明小鼠便秘后腸道菌群多樣性有所降低。與模型對(duì)照組相比，干酪乳桿菌低劑量組和陽性對(duì)照組的Shannon指數(shù)升高，而干酪乳桿菌中劑量組、高劑量組降低，表明干酪乳桿菌低劑量組、陽性對(duì)照組菌群多樣性較高，而干酪乳桿菌中劑量組、高劑量組的菌群多樣性較低。這與靳志敏等[18]用不同劑量植物乳桿菌對(duì)小鼠腸道菌群影響的研究結(jié)果相似，說明乳桿菌對(duì)腸道微生物區(qū)系具有一定的調(diào)節(jié)作用。

研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌通過競(jìng)爭(zhēng)腸道黏附位點(diǎn)及分泌抗菌物質(zhì)等方式抑制病原菌的定植和生長(zhǎng)繁殖，維持腸道健康[15]。本研究對(duì)便秘小鼠進(jìn)行干酪乳桿菌干預(yù)后，乳桿菌屬、另枝菌屬的豐度增加，普雷沃氏菌屬豐度降低。張董燕等[19]給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂卷曲乳桿菌，發(fā)現(xiàn)糞便菌群物種豐富度提高了，而且糞便中厚壁菌門、乳桿菌屬和光崗菌屬的比例也明顯增加。乳桿菌屬是公認(rèn)的益生菌，可通過產(chǎn)生乳酸、乙酸、過氧化氫、細(xì)菌素等抗菌物質(zhì)，在宿主腸道環(huán)境中發(fā)揮有益作用，并抑制腸道有害細(xì)菌的增長(zhǎng)來改善宿主腸道菌群的平衡，增強(qiáng)宿主對(duì)病原體的防御屏障功能[20]。1項(xiàng)研究表明，與對(duì)照組相比，功能性便秘的成人糞便中雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量明顯減少[21]。在服用益生菌后，短雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌和青春雙歧桿菌的數(shù)量顯著增加。對(duì)補(bǔ)充益生菌前后糞便的分析有助于檢測(cè)益生菌引起的腸道菌群的確切變化[22]。乳桿菌屬、另枝菌屬屬于腸道有益菌，可以保護(hù)腸道免疫系統(tǒng)不受外界環(huán)境刺激，增強(qiáng)腸道的黏膜功能，從而對(duì)炎癥進(jìn)行抵抗[23-24]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)便秘導(dǎo)致小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了炎癥反應(yīng)，在經(jīng)過干酪乳桿菌干預(yù)后，干酪乳桿菌通過增加腸道中乳桿菌屬、另枝菌屬的豐度，以及降低條件致病菌普雷沃氏菌屬的豐度，影響了腸道菌群與腸道病原體之間的競(jìng)爭(zhēng)，從而改善腸道菌群，達(dá)到緩解便秘的作用。

對(duì)小鼠腸道菌群在屬水平上進(jìn)行優(yōu)勢(shì)菌群分析，并且進(jìn)行組間差異分析發(fā)現(xiàn)，造模結(jié)束時(shí)6組小鼠腸道菌群中的優(yōu)勢(shì)菌群為乳桿菌屬、norank_f_Muribaculaceae、另枝菌屬、Odoribacter。其中差異顯著的物種有乳桿菌屬、Rikenellaceae_RC9_gut_group(P<0.05)、另枝菌屬、螺桿菌屬、普雷沃氏菌屬、嗜冷桿菌屬(P<0.01)、Prevotellaceae_NK3B31_group(P<0.001)。與正常對(duì)照組相比，便秘小鼠腸道菌群中乳桿菌屬、另枝菌屬豐度有不同程度的降低，而普雷沃氏菌屬、norank_f_Muribaculaceae豐度升高。干酪乳桿菌干預(yù)后，小鼠腸道優(yōu)勢(shì)菌群為norank_f_Muribaculaceae、擬普雷沃菌屬、嗜冷桿菌屬、另枝菌屬。其中差異顯著的物種有嗜冷桿菌屬、擬桿菌屬、Odoribacter(P<0.05)、葡萄球菌屬(P<0.01)、螺桿菌屬、普雷沃氏菌屬、普雷沃氏菌科NK3B31群(P<0.001)。與模型對(duì)照組相比，灌胃干酪乳桿菌的便秘小鼠腸道菌群中普雷沃氏菌屬、norank_f_Muribaculaceae豐度降低，另枝菌屬豐度升高；干酪乳桿菌中劑量組、干酪乳桿菌高劑量組、陽性對(duì)照組中乳桿菌屬豐度升高。提示便秘可導(dǎo)致腸道菌群發(fā)生改變。此結(jié)果表明干酪乳桿菌可以提高腸道中乳桿菌屬、另枝菌屬的豐度，并降低條件致病菌普雷沃氏菌屬的豐度，從而改善腸道菌群，達(dá)到緩解便秘作用。